Впервые криоконсервация (замораживание) эмбрионов было применено во вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ) в 1982 году. Вероятность наступления беременности с иcпользованием размороженных эмбрионов составляет примерно 10-15%.
Процедуру криоконсервации эмбрионов проводят в том случае, если после проведения лечения методом ЭКО у пациентов остаются «лишние» эмбрионы с хорошими показателями. Замороженные эмбрионы хранят в специальных пластиковых соломинках, находящихся в жидком азоте. Ограничений на срок хранения эмбрионов нет. Имеются данные об удачной беременности и родах с использованием эмбрионов, хранившихся 10 лет.
При отсутствии беременности после ЭКО с наступлением менструации (т.е. уже в следующем цикле) можно осуществлять перенос размороженных эмбрионов. В этом случае процедура роста фолликулов не проводится - назначаются лекарства, подготавливающие слизистую оболочку матки для переноса эмбрионов. Используемые препараты содержат женские гормоны, изменяющие в естественных условиях состояние слизистой оболочки матки во время второй фазы менструального цикла и готовят ее к имплантации эмбриона в случае успешного оплодотворения. Приблизительно в середине менструального цикла слизистая оболочка достигает нужных характеристик (толщины и структуры). Далее проводят размораживание эмбрионов и переносят их в полость матки. Так как при криоконсервации эмбрионов уплотняется их оболочка, проводится процедура вспомогательного хэтчинга (надсечение оболочки эмбриона).
Криоконсервация эмбрионов проводится лишь для эмбрионов с хорошими показателями качества и на строго определенной стадии их развития. Эмбрионы с плохими показателями не замораживаются - иначе происходит деградация – разрушение эмбрионов. Стадия развития играет важную роль в процедуре криоконсервации. Замораживаются эмбрионы на стадиях зигот, 2-х, 4-х, 8-ми клеток и бластоцисты.
Необходимо понимать, что эмбрионы после процедуры криоконсервации и размораживания возможно будут непригодны для использования в переносе из-за их деградации (разрушения). В таком случае, перенос эмбрионов соответственно не проводится.
В ходе подготовки слизистой оболочки матки проводят гормональный анализ, на основании которого делают вывод о состоянии слизистой оболочки. В случае отклонений гормональных параметров от нормальных процедура переноса эмбрионов невозможна, т.к. слизистая оболочка матки не может быть подготовлена. В таком случае можно провести повторную программу по подготовке эндометрия в следующем цикле.
Начинается на 20 день цикла. Делается укол диферелина или другого препарата, который блокирует выработку собственных гормонов. Дальше цикл полностью регулируется искусственными гормонами и делается подсадка.
После укола нужно ждать месячных, дальше на УЗИ и со 2-3 дня цикла, если все хорошо, назначают пить прогинову. Пить дней 12-14 - примерно до момента когда должна быть овуляция, в течение этих дней еще проводят УЗИ для контроля роста эндометрия. И дальше, когда врач считает, что эндометрий готов - назначают пить утрожестан. Первый день приема утрожестана считается днем овуляции, на 3 день после этого делают перенос трехдневочек и на 5 день соответственно - пятидневочек.
Схема похожа с вариантом 1, разница лишь в том, что накануне протокола не делается блокада. А в самом протоколе нужно сдавать гормоны и в зависимости от значений назначаются дозы искусственных гормонов.
В этом варианте никаких искусственных гормонов не назначают. С началом цикла врач регулярно проводит мониторинг состояния эндометрия и рост фолликулов до моменты овуляции. Дальше может быт назначен укол прегнила для стимулирования овуляции в определенный момент (а возможно и без него - зависит от каждого конкретного случая). И дальше происходит перенос эмбрионов на 3 или 5 день в зависимости от их возраста.
2. Криопротокол на заместительной гормональной терапии (крио на ЗГТ).
3. Криопротокол в естественном цикле (крио в ЕЦ).
Плюсы первых двух вариантов: т.к. цикл полностью искусственный - врач точно знает день овуляции и момент, когда открывается так называемое имплантационное окно.
Минус - в том, что организм нагружается гормонами как до подсадки, так и после нее.
Плюс третьего варианта - все происходит практически как в естественных условиях, организм не нагружен гормонами, поддержка после переноса - минимальная.
Минус - не всегда удается точно отследить овуляцию, иногда может случить цикл, в котором не созревает доминантный фолликул, или появляется киста.
Выбор варианта осуществляется врачом и делается это с учетом индивидуальных особенностей каждой конкретной пациентки и ее анамнеза.
Очень аккуратно! Во время процесса заморозки, даже при соблюдении строжайшего порядка в лабораториях ЭКО, эмбрионы должны преодолеть опасность формирования кристаллов льда, чрезмерного изменения температуры, PH и концентрации электролитов в среде, а так же изменения трансмембранного потенциала (transmembrane water movement).
Клетки эмбриона, как и другие живые ткани, содержат воду. Вода формирует острые кристаллы льда, которые разрастаются в процессе заморозки. Если их не убрать в самом начале, эмбрион может разорваться. При замораживании также образуются губительные для эмбриона соли в воде. Во избежание этой проблемы, из эмбрионов вода удаляется и заменяется криозащитным раствором, который не формирует льда. Эмбрионы помещаются в солевой раствор фосфатного буфера на некоторое время (5-10 минут). Затем помещаются в раствор высококонцентрированного проникающего криопротектора (highly osmotic cryoprotectant fluid). Эмбрион временно сжимается, т.к. быстро дегидрируется. Затем быстро расширяется обратно, когда криопротектор замещает воду. Эта процедура занимает всего несколько минут, после чего эмбрион готов к заморозке. В разных клиниках соответствующие протоколы варьируются, но проходят по одному сценарию.
Эмбрионы помещаются в стеклянные или пластиковые соломинки для дальнейшего хранения. Обычно в каждую соломинку на хранение помещаются 1-4 эмбриона из одного протокола с учетом того, сколько эмбрионов планируется в будущем разморозить и сразу подсадить. Соломинки предварительно охлаждаются, помещаются в канистры, которые опускаются в терморегулируемые изолированные хранилища-танки (сосуды Дьюара) с жидким азотом. Постепенный процесс заморозки занимает несколько часов.
После того как эмбрионы достали из криобанка, они размораживаются до комнатной температуры меньше чем за минуту или две. Но полностью процесс разморозки занимает около 40 минут перед тем как эмбрионы готовы к переносу или дальнейшей заморозке.
Эмбрионы достаются из канистр и они остывают до комнатной температуры. В отличие от подготовки эмбрионов к процессу заморозки, здесь криозащитный раствор постепенно удаляется и замещается водой при помещении эмбрионов в высокорастворимые среды, в которых содержится больше воды и меньше криопотекторов. И снова, эмбрион может разорваться при поступлении воды в клетки. Так что этот процесс аккуратно контролируется. Затем эмбрион доводят до температуры тела и подсаживают, либо помещаются в культурную среду в инкубатор в ожидании переноса. Обычно, перед подсадкой качество эмбрионов переоценивается.
Насколько хорошо эмбрионы переживут разморозку зависит от самого протокола заморозки/разморозки и качества эмбрионов перед заморозкой. Эмбрионы, которые были более высокого качества перед заморозкой, лучше переживают крио. Многие клиники не замораживают эмбрионы неудобоваримого качества. К 3 дню они должны быть минимум 6-ти клеточными и иметь не более 20-25% фрагментаций, иначе они не переживут процесс. Обычно процент разморозки варьируется от 50 до 80 %, достигая в большинстве лабораторий более 70%. Важно узнать процент удачной разморозки в клинике, в которой ты будешь делать протокол.
После разморозки эмбрионы оцениваются. В некоторых все клетки погибнут. Такие эмбрионы называются «атретичными» (atretic). Другие могут иметь часть поврежденных клеток (таких эмбрионов большинство). Повреждения могут быть незначительными или серьезными. Несмотря на то, что процент последующих беременностей несомненно обратно пропорционален степени повреждения эмбриона, такие эмбрионы часто восстанавливаются и все еще имеют возможность привести к рождению ребенка. Такой случай был ярко продемонстрирован самыми первыми родами после крио протокола в Австралии в 1984 году. Эмбрион был заморожен на стадии 8 клеток, но 2 клетки погибли в процессе заморозки/разморозки. Его перенесли 6-ти клеточным. Он выжил, имплантировался и, в конечном итоге, доказал миру, что криоконсервация человеческого эмбриона с успешным исходом возможна. С того времени, бесчисленное количество детей было рождено благодаря этой процедуре и часто после переноса эмбрионов, которые в какой-то степени пережили гибель части своих клеток.
Самое лучшее качество эмбрионов тех, в которых клетки остались на 100% неповрежденными. Было предположено, что большинство таких эмбрионов настолько же жизнеспособны, как если бы они не были заморожены. Но таких эмбрионов немного.
По наблюдениям, эмбрионы с четным количеством клеток имеют преимущества перед эмбрионами с нечетным количеством клеток; они переживают крио на 5-10% больше. Также, по наблюдениям, эмбрионы с донорскими яйцеклетками переносят крио лучше (примерно на 2-5%), чем эмбрионы того же качества с использованием яйцеклетки пары, лечащейся от бесплодия.
Процент выживания также может зависеть от того, на какой стадии был заморожен эмбрион. Есть свидетельство того, что эмбрионы, замороженные на более ранней стадии, лучше переносят крио. Возможно потому, что они более просты по структуре и еще не затронуты мембраны ядра. (По этой причине, если есть очень большое количество эмбрионов хорошего качества, одна порция может быть заморожена на стадии 2PN, другая – помещена в лабораторию для культивирования 8-клеточных эмбрионов и бластоцист для свежего переноса). Однако, также допускается, что балстоцисты могут лучше пережить крио, т.к. у них больше клеток и им проще компенсировать потерю некоторых из них. На практике, происходит по-разному и зависит от варианта крио протокола, используемого в каждой отдельной лаборатории. Что бы не применяла твоя клиника, самое главное, чтобы это приводило у них к результату.
При отсутствии беременности после ЭКО с наступлением менструации (т.е. уже в следующем цикле) можно осуществлять перенос размороженных эмбрионов. В этом случае процедура роста фолликулов не ...